实验技能
这里展示了我在博士期间建立并熟练掌握的核心实验技术体系,从微观流体控制到单细胞精度的荧光成像,再到多组学的数据挖掘。(若无特殊说明,皆由个人独立操作完成)
💧 01. 微流控实验平台搭建
具备独立完成微流控芯片设计、加工及动态成像平台搭建的全链路能力,用于在体外精准模拟复杂的细菌生长微环境。
1. 芯片设计
利用 AutoCAD 建立微流控芯片二维/三维模型,精确计算流体通道尺寸。
2. 光刻制模
在超净间操作匀胶机与曝光机,使用光刻胶将设计转化为高精度硅片阳模。利用光刻机蚀刻微流控芯片
3. 微流控芯片制作
熟练掌握PDMS倒模固化流程,使用等离子清洗机将芯片与盖玻片进行不可逆键合。
4. 平台搭建
集成注射/气体泵、恒温系统与显微镜,实现高度可控的长时程活细胞动态培养平台。
🧬 02. 菌株基因编辑与改造
熟练掌握微生物学核心实验操作,能够从分子层面快速构建所需的目标菌株体系。
1. 菌株培养
熟练掌握大肠杆菌等模式微生物的厌氧与好氧培养技术,精准控制生长条件及生长曲线的测定。
2. 基因编辑与质粒改造
熟练应用CRISPR-Cas系统及传统同源重组技术进行高效的基因敲除、敲入,以及质粒载体的构建与改造。
3. 生理表征
通过MIC/MBC测定、生长曲线、形态学观察等手段,系统评估改造后菌株在特定环境压力下的生理表型变化。
📊 03. 组学实验与分析
多组学技术挖掘潜在的功能靶点。
1. 样品收集与制备
高质量完成代谢物提取、总 RNA 提取提纯以及标准化的转录组文库构建 (建库)。
2. 样品上机(由技术人员辅助完成)
完成样本的精确定量与质控(QC),熟悉主流高通量测序平台及质谱平台的上机标准与参数要求。
3. 数据分析
处理下机原始数据,完成序列比对、差异表达基因 (DEG) 筛选以及 KEGG/GO 等下游代谢通路的富集分析。
4. 可视化呈现
利用Matlab、Python或R语言将海量多维的组学数据转化为直观、可解释的学术级热图、PCA图与网络图。
📸 04. 显微成像技术
擅长通过多维度的显微成像技术,捕捉微观生命活动的动态瞬间,为机制解析提供最直观的视觉证据。
1. 单细胞成像
在高倍率下实现单细胞精度的形态学追踪与细胞内荧光探针定位。
2. 群体成像
追踪细菌生物被膜等复杂群落的整体空间结构分布与亚群动态扩展演化过程。
3. 显微镜高阶操作
精通宽场荧光显微镜及激光共聚焦显微镜 (CLSM) 的操作与调试,熟练设置Z轴层扫(Z-stack)及时间序列多通道采集参数。